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本试剂盒是基于TRIzox改进后的柱式总RNA提取试剂盒，本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本，在特有的高盐状态下，RNA特异性地与硅基质结合，在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染，得到的RNA纯度更好，质量更高。本制品可从各细胞或组织中快速提取总RNA，每次可处理30～50mg组织或5×10⁶细胞，可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除，提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

• 预防RNase污染，应注意以下几方面：
  
  • 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
    
  • 配制溶液应使用无RNase的水。
    
  • 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
• 样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
  
• 使用前若发现TRIzox Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
  
• 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

• 样品处理
  
  • 组织：30～50mg组织在液氮中充分研磨后加入1mL TRIzox Reagent，或在组织样品中加入1mL TRIzox Reagent后匀浆处理。
    注意：样品体积不超过TRIzox Reagent体积的10%。
    
  • 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量，每10cm²加入1mL TRIzox Reagent。
    
  • 细胞悬液：离心收集细胞。每5×10⁶细胞加入1mL TRIzox Reagent。
• 样品中加入TRIzox Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
  
• 以每1mL TRIzox Reagent加入200μL氯仿的比例加入氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。
  
• 4℃ 12000rpm(~13400×g)离心10分钟，此时样品分为三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
  
• 在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制)，颠倒混匀。
  
• 将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入350μL Buffer RW1，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 配制DNase I混合液：取52μL RNase-Free Water，向其中加入8μL 10×Reaction Buffer和20μL DNase I(1U/μL)，混匀，配制成终体积为80μL的反应液。
  
• 向吸附柱中直接加入80μL DNase I混合液，20～30℃孵育15分钟。
  
• 向吸附柱中加入350μL Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 重复步骤11。
  
• 12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
  
• 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30～50μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
  注意：
  
  • RNase-Free Wate体积不应小于30μL，体积过小影响回收率。
    
  • 如果要提高RNA的产量，可用30～50μL新的RNase-Free Water重复步骤14。
    
  • 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤14。